濟南血(xue)液中(zhong)乙醇的(de)測(ce)定頂空氣相色譜法(fa)概述(shu)：

1 范圍

本技(ji)術規(gui)范規(gui)定了血液中乙醇的頂(ding)空氣相色譜測定方法。

本技術規范適用于血液中乙醇的定性(xing)及(ji)定量分析。

本技術規范(fan)的方法檢出限為0.01mg/mL；定量下限為0.05mg/mL。

2 規范性引用文件(jian)

下列文件(jian)對(dui)于(yu)(yu)本(ben)技(ji)(ji)(ji)術規(gui)范的(de)(de)應(ying)用(yong)(yong)是(shi)*的(de)(de)。凡(fan)是(shi)注(zhu)日(ri)期(qi)的(de)(de)引用(yong)(yong)文件(jian)，僅注(zhu)日(ri)期(qi)的(de)(de)版本(ben)適用(yong)(yong)于(yu)(yu)本(ben)技(ji)(ji)(ji)術規(gui)范。凡(fan)是(shi)不注(zhu)日(ri)期(qi)的(de)(de)引用(yong)(yong)文件(jian)，其版本(ben)（包括所有的(de)(de)修改單(dan)）適用(yong)(yong)于(yu)(yu)本(ben)技(ji)(ji)(ji)術規(gui)范。

GB/T 6682  分析實驗室(shi)用(yong)水規格和試驗方(fang)法(fa)（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）

GA/T 122  毒物(wu)分析名(ming)詞術語

3 原理

本法(fa)利(li)用乙醇的(de)易揮(hui)發(fa)性，以(yi)叔丁醇為(wei)內標，用頂(ding)空氣(qi)相色譜火(huo)焰離子化檢測(ce)器進行檢測(ce)，經(jing)與平行操作(zuo)的(de)乙醇對(dui)照品比較，以(yi)保留時間(jian)進行定性分析(xi)；以(yi)峰面積為(wei)依據，用內標法(fa)定量。

4 試劑和材料

除另有說明(ming)外，水為GB/T 6682規(gui)定的(de)二(er)級水。

4.1　乙醇

色譜純。

4.2　乙醇(chun)標準溶(rong)液

精密稱取適量乙醇(chun)(chun)，用(yong)水(shui)配成10.0mg/mL乙醇(chun)(chun)標準儲(chu)備(bei)溶液(ye)。儲(chu)備(bei)液(ye)在(zai)冰(bing)箱(xiang)中冷藏密閉(bi)保存，有效(xiao)(xiao)期(qi)(qi)為6個(ge)月。試驗中所用(yong)其它(ta)濃度的標準溶液(ye)均從上述儲(chu)備(bei)液(ye)稀釋而得，在(zai)冰(bing)箱(xiang)中冷藏密閉(bi)保存，有效(xiao)(xiao)期(qi)(qi)為3個(ge)月。

4.3　叔丁醇

色譜純。

4.4　叔丁醇溶液

精密稱(cheng)取適量叔(shu)(shu)丁(ding)醇，用(yong)水配成5.0mg/mL叔(shu)(shu)丁(ding)醇儲備液。儲備液在冰(bing)箱(xiang)中(zhong)冷藏(zang)密閉保存，有(you)效期(qi)為12個月。將儲備液用(yong)水稀釋，得40.0μg/mL叔(shu)(shu)丁(ding)醇內標工作液，在冰(bing)箱(xiang)中(zhong)冷藏(zang)密閉保存，有(you)效期(qi)為6個月。

5 儀器

5.1　氣相色譜儀

配火焰離子(zi)化檢測(ce)器(qi)（FID）。

5.2　頂空進樣器

配(pei)1mL定量進樣(yang)環。

5.3　樣品瓶

10mL，頂空自(zi)動(dong)進樣器用(yong)。

5.4　硅橡膠墊

5.5　鋁帽

5.6　密封鉗

5.7　精密移液器

5.8　自動稀釋儀

6 測定步驟

6.1　樣品處理

用精密移液(ye)器或自動稀釋儀取待測血液(ye)0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇(chun)內(nei)標工作液(ye)，加入樣品瓶內(nei)，蓋上硅橡膠墊(dian)，用密封鉗加封鋁帽，混勻(yun)。

6.2　測定

6.2.1　頂空(kong)氣相色譜測(ce)定參考條件

a） 色譜柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛細管柱或相當者；

柱溫(wen)：恒溫(wen)40°C；

色(se)譜柱(zhu)(zhu)（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛(mao)細管柱(zhu)(zhu)或相當者；

柱溫(wen)：恒溫(wen)40°C；

b）載(zai)氣：氮(dan)氣，純度≥99.999%，流速8mL/min；

c）進樣口(kou)溫度：150°C；

d）檢測器(qi)溫(wen)度：250°C；

e）加熱(re)箱溫度：65°C；

f）定量環溫度：105°C；

g）傳輸線(xian)溫度：110°C；

h）氣相循環時間：3.5min；

i）樣品瓶加熱(re)平衡時間：10.0min；

j）樣品瓶(ping)加壓時間(jian)：0.10min；

k）定量環充滿時間(jian)：0.10min；

l）定(ding)量環平衡時(shi)間：0.05min；

m）進樣時間：1.00min。

6.2.2　定(ding)性測定(ding)

樣(yang)(yang)品(pin)溶液(ye)按照(zhao)(zhao)頂(ding)空氣相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)測定(ding)(ding)條(tiao)件(jian)測定(ding)(ding)，以叔丁(ding)醇(chun)為內標(biao)，記(ji)錄色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)的保(bao)留時間(jian)。將待測樣(yang)(yang)品(pin)色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)的保(bao)留時間(jian)與乙醇(chun)標(biao)準對照(zhao)(zhao)品(pin)的保(bao)留時間(jian)比較(jiao)，相(xiang)對誤(wu)差在±2%內，空白對照(zhao)(zhao)樣(yang)(yang)品(pin)內標(biao)物色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)正常而無乙醇(chun)的色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)，一(yi)般可(ke)以認為待測樣(yang)(yang)品(pin)中含有乙醇(chun)；必要時，選擇(ze)不同(tong)的色(se)譜(pu)(pu)(pu)條(tiao)件(jian)或用(yong)氣相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)-質譜(pu)(pu)(pu)法確證。如果(guo)內標(biao)物色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)正常，而無乙醇(chun)的色(se)譜(pu)(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)時，可(ke)認為檢驗結(jie)果(guo)為陰性。乙醇(chun)對照(zhao)(zhao)品(pin)和內標(biao)氣相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)圖，參見附(fu)錄A。

6.2.3　定量測定

本(ben)方法(fa)采(cai)用內標(biao)(biao)法(fa)－校準(zhun)曲(qu)線法(fa)或內標(biao)(biao)法(fa)－單點校正法(fa)定(ding)(ding)量測定(ding)(ding)。

6.2.3.1  內(nei)標法(fa)－校(xiao)準曲(qu)線法(fa)

采用內(nei)標(biao)-校準(zhun)曲線法測(ce)定（見(jian)附錄B）。將乙(yi)醇(chun)對(dui)照品溶液進(jin)樣，以(yi)乙(yi)醇(chun)和內(nei)標(biao)峰面積比(bi)為(wei)縱(zong)坐標(biao)，乙(yi)醇(chun)對(dui)照品工作溶液濃度為(wei)橫坐標(biao)繪制標(biao)準(zhun)曲線，用標(biao)準(zhun)曲線對(dui)待測(ce)樣品進(jin)行(xing)定量，所測(ce)樣品中乙(yi)醇(chun)的濃度值應在線性范(fan)圍內(nei)。

6.2.3.2  內標法(fa)－單(dan)點校正法(fa)

待測(ce)血(xue)液樣品乙醇濃度在標(biao)準溶液濃度的±30%內可用單點法定量。

6.3　平行試驗

按(an)以上步驟對同一(yi)待測樣品(pin)進(jin)行平(ping)行試驗。

單柱單檢測器兩(liang)(liang)份(fen)(fen)樣品測定結果按兩(liang)(liang)份(fen)(fen)樣品的平(ping)均值計算，雙樣相對相差不(bu)得超(chao)過10％（有凝塊的血(xue)樣不(bu)超(chao)過15％）。雙樣相對相差按式（1）計算：

  ;                          ;        | C1 - C2|

雙(shuang)樣相(xiang)對(dui)相(xiang)差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100     ………………………………（1）

                                      `C

式中：

C1、C2¾¾兩(liang)份樣品平行定(ding)量測定(ding)的結果(guo)；

`C ¾¾兩份樣品平行定量測定結果的平均值(zhi)(C1+C2)/2。

雙柱雙檢測(ce)器兩份樣品測(ce)定結果(guo)(guo)的(de)相(xiang)對標準偏差RSD（%）若不超過(guo)5％時(shi)（有凝塊的(de)血(xue)樣不超過(guo)10%），結果(guo)(guo)按兩份樣品結果(guo)(guo)的(de)平均值計算。

7 結(jie)果計算

血液(ye)中乙(yi)醇濃(nong)度測定采用內標法(fa)－校準曲線(xian)法(fa)定量(liang)或按(an)式(2)計(ji)算：

                            ;     A´ Ai′´c         

                   C = ¾¾¾¾¾¾         …………………………………（2）

                                  A′´Ai            

式中：

C¾¾血液(ye)樣品中乙(yi)醇(chun)濃度，單位為(wei)毫克每毫升(mg/mL)；

A¾¾血液樣品中乙醇(chun)的峰面積(ji)；

A′¾¾標準溶液中乙醇的(de)峰面積；

Ai′¾¾標(biao)(biao)準溶液(ye)中內標(biao)(biao)物(wu)的峰面積；

Ai¾¾血液樣品中內標物(wu)的峰(feng)面積；

c¾¾標準溶液中乙醇濃度，單位(wei)為毫(hao)克(ke)每毫(hao)升(mg/mL)。

附　錄　A
（資料性附錄）
乙醇對照品和內(nei)標氣相(xiang)色譜圖(tu)

A.1 按(an)色譜(pu)柱（1）條件得乙醇對照(zhao)品和內標氣(qi)相色譜(pu)圖(tu)，見圖(tu)A.1。

圖(tu)A.1 按色(se)(se)譜柱（1）條件得的(de)乙醇對照品(pin)和內標氣相色(se)(se)譜圖(tu)

A.2 按色譜(pu)柱(zhu)（2）條件得乙醇對照品和內標氣相色譜(pu)圖，見(jian)圖A.2。