血液中乙醇的測定

頂空氣相色譜法

1 范圍

本技(ji)術(shu)規(gui)范(fan)規(gui)定了血液中乙醇的頂(ding)空氣相色譜測定方法(fa)。

本技術規范(fan)適(shi)用(yong)于血液中乙醇的定(ding)性(xing)及定(ding)量分析。

本技(ji)術規范(fan)的方法檢出限為0.01mg/mL；定量下限為0.05mg/mL。

2 規范性引用(yong)文件

下(xia)列文件(jian)(jian)對于本(ben)(ben)(ben)(ben)技(ji)(ji)術規范的(de)(de)應用(yong)是(shi)(shi)*的(de)(de)。凡(fan)是(shi)(shi)注日期的(de)(de)引用(yong)文件(jian)(jian)，僅(jin)注日期的(de)(de)版本(ben)(ben)(ben)(ben)適用(yong)于本(ben)(ben)(ben)(ben)技(ji)(ji)術規范。凡(fan)是(shi)(shi)不注日期的(de)(de)引用(yong)文件(jian)(jian)，其版本(ben)(ben)(ben)(ben)（包括所(suo)有的(de)(de)修改單(dan)）適用(yong)于本(ben)(ben)(ben)(ben)技(ji)(ji)術規范。

GB/T 6682  分析(xi)實驗室用水(shui)規(gui)格和試驗方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）

GA/T 122  毒物分析名詞術(shu)語

3 原理

本(ben)法(fa)(fa)利用乙(yi)醇(chun)的(de)易揮發(fa)性，以叔丁醇(chun)為內標，用頂(ding)空(kong)氣(qi)相(xiang)色譜火焰離子化檢(jian)測器進行(xing)(xing)檢(jian)測，經與平行(xing)(xing)操作的(de)乙(yi)醇(chun)對照品比較，以保留時(shi)間進行(xing)(xing)定性分(fen)析(xi)；以峰面積為依據，用內標法(fa)(fa)定量。

4 試(shi)劑和材料

除另有(you)說(shuo)明外，水為GB/T 6682規定的二級(ji)水。

4.1　乙醇

色譜純。

4.2　乙(yi)醇標準(zhun)溶液

精密稱取適量乙醇，用(yong)水配(pei)成10.0mg/mL乙醇標準(zhun)儲備溶(rong)液(ye)(ye)。儲備液(ye)(ye)在冰箱中冷(leng)藏密閉(bi)保存，有效期(qi)為6個月。試驗中所(suo)用(yong)其它濃度(du)的標準(zhun)溶(rong)液(ye)(ye)均從上述儲備液(ye)(ye)稀釋而(er)得，在冰箱中冷(leng)藏密閉(bi)保存，有效期(qi)為3個月。

4.3　叔丁醇

色譜純。

4.4　叔丁醇溶液

精(jing)密(mi)稱取適量(liang)叔(shu)丁(ding)醇，用(yong)水配成(cheng)5.0mg/mL叔(shu)丁(ding)醇儲備(bei)液(ye)。儲備(bei)液(ye)在(zai)冰箱中冷藏密(mi)閉(bi)保存，有(you)效(xiao)期(qi)為(wei)12個月。將儲備(bei)液(ye)用(yong)水稀釋，得40.0μg/mL叔(shu)丁(ding)醇內標工(gong)作液(ye)，在(zai)冰箱中冷藏密(mi)閉(bi)保存，有(you)效(xiao)期(qi)為(wei)6個月。

5 儀器

5.1　氣相色譜儀

配(pei)火焰離子化檢測器（FID）。

5.2　頂空進樣器

配1mL定量進樣環(huan)。

5.3　樣品瓶

10mL，頂空自動進樣器用(yong)。

5.4　硅橡膠墊

5.5　鋁帽

5.6　密封鉗

5.7　精密移液器

5.8　自動稀釋儀

6 測(ce)定步(bu)驟(zou)

6.1　樣品處理

用精(jing)密移液(ye)器或自動稀釋儀取(qu)待測血液(ye)0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔(shu)丁醇(chun)內標工作液(ye)，加(jia)入樣品(pin)瓶內，蓋上硅(gui)橡膠墊，用密封鉗加(jia)封鋁(lv)帽，混勻。

6.2　測定

6.2.1　頂空氣(qi)相色譜測定參考條件

a） 色譜柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛細管柱或相當者；

柱溫(wen)：恒溫(wen)40°C；

色譜柱（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石(shi)英毛細(xi)管柱或相當(dang)者(zhe)；

柱溫：恒(heng)溫40°C；

b）載(zai)氣：氮(dan)氣，純度≥99.999%，流速8mL/min；

c）進樣口溫(wen)度：150°C；

d）檢測器溫(wen)度(du)：250°C；

e）加熱箱溫度：65°C；

f）定量環溫度：105°C；

g）傳輸線溫(wen)度：110°C；

h）氣相循環時(shi)間：3.5min；

i）樣品(pin)瓶加熱平衡時間：10.0min；

j）樣品瓶(ping)加(jia)壓時間：0.10min；

k）定量環(huan)充滿時間：0.10min；

l）定量環平衡(heng)時(shi)間：0.05min；

m）進樣時間：1.00min。

6.2.2　定(ding)性測定(ding)

樣(yang)品(pin)(pin)(pin)溶(rong)液按(an)照(zhao)頂空氣(qi)相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)測(ce)(ce)定條件測(ce)(ce)定，以(yi)叔(shu)丁醇(chun)(chun)為內(nei)(nei)標，記錄(lu)(lu)色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)的(de)保(bao)(bao)留時(shi)間(jian)(jian)。將待(dai)測(ce)(ce)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)的(de)保(bao)(bao)留時(shi)間(jian)(jian)與乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)標準對照(zhao)品(pin)(pin)(pin)的(de)保(bao)(bao)留時(shi)間(jian)(jian)比較，相(xiang)對誤差在±2%內(nei)(nei)，空白對照(zhao)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)內(nei)(nei)標物色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)正(zheng)常而無(wu)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)的(de)色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)，一般(ban)可以(yi)認(ren)為待(dai)測(ce)(ce)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中含有(you)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)；必要時(shi)，選擇不(bu)同的(de)色(se)譜(pu)(pu)條件或用氣(qi)相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)-質譜(pu)(pu)法確證(zheng)。如果內(nei)(nei)標物色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)正(zheng)常，而無(wu)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)的(de)色(se)譜(pu)(pu)峰(feng)(feng)(feng)時(shi)，可認(ren)為檢驗(yan)結(jie)果為陰性。乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)對照(zhao)品(pin)(pin)(pin)和內(nei)(nei)標氣(qi)相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)圖，參見附錄(lu)(lu)A。

6.2.3　定量測定

本(ben)方法采用內標法－校準(zhun)曲線法或內標法－單點校正法定(ding)(ding)量(liang)測定(ding)(ding)。

6.2.3.1  內標法－校準曲線(xian)法

采用內標-校準曲線(xian)法測定（見(jian)附錄(lu)B）。將乙(yi)(yi)醇(chun)對照(zhao)品(pin)溶液(ye)(ye)進樣，以乙(yi)(yi)醇(chun)和內標峰面(mian)積比為(wei)縱坐標，乙(yi)(yi)醇(chun)對照(zhao)品(pin)工(gong)作溶液(ye)(ye)濃度為(wei)橫坐標繪(hui)制(zhi)標準曲線(xian)，用標準曲線(xian)對待測樣品(pin)進行定量(liang)，所測樣品(pin)中乙(yi)(yi)醇(chun)的濃度值應在線(xian)性范圍內。

6.2.3.2  內標法－單點校正(zheng)法

待測血液樣品乙醇濃(nong)度在標準溶液濃(nong)度的±30%內可用(yong)單點法定(ding)量(liang)。

6.3　平行試驗

按以上步驟(zou)對同一待測(ce)樣品進行平行試驗。

單柱(zhu)單檢測(ce)器兩份樣(yang)品(pin)測(ce)定結果按(an)兩份樣(yang)品(pin)的平均值計算，雙樣(yang)相對相差(cha)不(bu)得超(chao)過10％（有(you)凝塊的血樣(yang)不(bu)超(chao)過15％）。雙樣(yang)相對相差(cha)按(an)式（1）計算：

                                    | C1 - C2|

雙樣相對相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100     ………………………………（1）

                                      `C

式中：

C1、C2¾¾兩份樣品平(ping)行定量測定的結果(guo)；

`C ¾¾兩(liang)份樣品(pin)平行定量(liang)測定結果的平均(jun)值(C1+C2)/2。

雙柱(zhu)雙檢測器兩份樣品測定結果(guo)(guo)的相對標(biao)準(zhun)偏差RSD（%）若(ruo)不超過(guo)5％時(shi)（有凝塊的血樣不超過(guo)10%），結果(guo)(guo)按兩份樣品結果(guo)(guo)的平均值計算。

7 結果(guo)計(ji)算

血(xue)液(ye)中乙(yi)醇濃度測定采用內標(biao)法－校準曲(qu)線法定量或(huo)按(an)式(2)計算(suan)：

                                 A´ Ai′´c         

                   C = ¾¾¾¾¾¾         …………………………………（2）

                                  A′´Ai            

式中：

C¾¾血(xue)液樣品中乙醇濃(nong)度，單(dan)位為毫克每毫升(sheng)(mg/mL)；

A¾¾血液樣品中乙醇的峰面積；

A′¾;¾標準溶液(ye)中(zhong)乙醇的(de)峰面積；

Ai′¾;¾標準(zhun)溶液中(zhong)內標物的峰面積；

Ai¾¾血液樣品中內(nei)標物的峰面積；

c¾¾標準溶液中乙醇濃(nong)度，單位為毫(hao)克每(mei)毫(hao)升(sheng)(mg/mL)。

附　錄　A
（資料性附錄）
乙(yi)醇對照品和(he)內標氣相色譜(pu)圖(tu)

A.1 按色譜(pu)柱（1）條件得乙醇對照品和內標氣相色譜(pu)圖，見圖A.1。

圖A.1 按色譜柱（1）條件(jian)得的乙醇(chun)對照品和內標氣(qi)相色譜圖

A.2 按(an)色(se)譜柱（2）條件得乙醇對照品和內標氣相色(se)譜圖，見圖A.2。